Einführung in die organisator ische Verarbeitung

„ Gewebe verarbeitung “bezieht sich auf eine Reihe von notwendigen Schritten, die tierisches oder menschliches Gewebe von der Fixierung stufe bis zu dem Zustand vorbereiten, dass es mit geeignetem histologischem Wachs ausreichend infiltriert ist. damit es auf einem Mikro tom geschnitten werden kann.

Die Bedeutung der Gewebe verarbeitung

Labor leiter betonen oft die Bedeutung der Gewebe verarbeitung für ihre Mitarbeiter. Es ist wichtig zu verstehen, dass die Verwendung eines unangemessenen Verarbeitung plans oder grundlegende Fehler (wie falsches Nachfüllen oder Sequenz ieren von Reagenzien) dazu führen kann, dass Gewebeproben nicht abschneid bar sind. Dies bedeutet, dass sie keine nützlichen visuellen Informationen liefern. Diese Situation ist in menschlichen diagnostischen Geweben besonders schwer wiegend, da ganze Proben in einer einzigen Charge verarbeitet werden. Wenn das Gewebe in solchen Fällen beschädigt ist, steht möglicher weise kein Ersatz gewebe für weitere Analysen zur Verfügung, was zu einer Situation führt, in der das Labor dem Patienten erklären muss, warum keine Diagnose gestellt werden konnte. Obwohl mechanische oder elektrische Ausfälle derAutomatische Gewebe bearbeitungs maschineKann auftreten, die meisten Verarbeitung probleme werden durch menschliche Fehler verursacht. Daher ist es von entscheidender Bedeutung, die Bedeutung einer angemessenen Aus-und Weiterbildung für das Gewebe verarbeitung personal zu betonen. Beim Einrichten von Verarbeitung programmen für jeden Lauf muss Vorsicht walten lassen, um die besten Ergebnisse zu erzielen.

Überblick über die Verarbeitung schritte des Paraffin abschnitts Gewebe

1. Sammeln Sie frische Proben

Frische Gewebeproben stammen aus verschiedenen Quellen und sind anfällig für Schäden, wenn sie von Patienten oder versuchs tieren entfernt werden. Daher müssen sie sorgfältig behandelt und so schnell wie möglich nach der Dissektion fixiert werden. Idealerweise sollte die Fixierung am Ort der Extraktion erfolgen, beispiels weise im Operations saal. Wenn dies nicht möglich ist, sollte es sofort bei der Ankunft im Labor behoben werden.

2. Fixierung

Die Probe wird in ein flüssiges Fixier mittel wie eine Formaldehyd lösung wie Formalin eingetaucht. Dieses Mittel infiltriert allmählich das Gewebe und induziert chemische und physikalische Veränderungen, die das Gewebe aushärten und konservieren, während es während der nachfolgenden Verarbeitung stufen geschützt wird. Nur wenige Reagenzien sind zur Fixierung geeignet, da sie bestimmte Eigenschaften haben müssen, die für diese Aufgabe geeignet sind. Beispiels weise müssen Gewebe komponenten eine bestimmte chemische Reaktivität beibehalten, um später bestimmte Färbe techniken anzuwenden. Formalin (normaler weise phosphat gepuffert) ist das am häufigsten verwendete Fixativ zur Konservierung von Geweben, die zu Paraffin abschnitten verarbeitet werden. Idealerweise sollten die Proben lange genug in der Fixier lösung bleiben, um alle Gewebe teile zu infiltrieren, gefolgt von einem Zeitraum, in dem sich die chemische Fixierung reaktion ausgleichen kann (Fixierung szeit). Im Allgemeinen sollte die Fixierung szeit für Proben 6 bis 24 Stunden betragen. Die meisten Labors betrachten den Fixierung schritt als die erste Stufe des Verarbeitung programms. Nach der Fixierung müssen Proben möglicher weise weiter zerlegt werden, um geeignete Bereiche für die Bewertung auszuwählen. Verarbeitete Proben werden in ordnungs gemäß gekennzeichnete Kassetten (kleine perforierte Körbe) gelegt, um sie von anderen Proben zu unterscheiden. Die Dauer der Proben behandlung hängt von der Größe und dem Typ der größten und kleinsten Proben, dem spezifischen verwendeten Prozessor, den ausgewählten Lösungsmitteln, der Lösungsmittel temperatur und anderen Variablen ab.

3. Dehydration

Da geschmolzenes Paraffin wachs hydrophob ist (nicht gut mit Wasser vermischt), ist es notwendig, den größten Teil des Wassers aus den Proben vor der Wachs infiltration zu entfernen. Bei diesem Prozess werden die Proben typischer weise in eine Reihe von Ethanol (Alkohol)-Lösungen mit zunehmender Konzentration getaucht, die in absolutem Ethanol gipfeln. Ethanol kann sich in jedem Verhältnis mit Wasser mischen und das Wasser in den Proben nach und nach durch Alkohol ersetzen. Die Verwendung einer allmählich steigenden Konzentration sequenz minimiert die übermäßige Gewebe verformung.

Für Proben, die nicht dicker als 4mm sind, ist eine typische Dehydration sequenz:

70% Ethanol 15 Minuten

90% Ethanol 15 Minuten

100% Ethanol 15 Minuten

100% Ethanol 15 Minuten

100% Ethanol 30 Minuten

100% Ethanol 45 Minuten

Zu diesem Zeitpunkt sollte das gesamte Wasser der Probe mit Ausnahme minimaler Mengen fest gebundenen (molekularen) Wassers entfernt werden.

4. Clearing

Obwohl das Gewebe jetzt einen minimalen Wassergehalt hat, können wir es leider nicht mit Wachs infiltrieren, da sich Wachs und Ethanol nicht gut vermischen. Daher muss ein Zwischen lösungsmittel verwendet werden, das sowohl mit Ethanol als auch mit Paraffin wachs kompatibel ist. Dieses Lösungsmittel ersetzt das Ethanol im Gewebe, das dann durch geschmolzenes Paraffin wachs ersetzt wird. Diese Phase des Programms wird als "Clearing" bezeichnet, und die verwendeten Chemikalien werden als "Clearing-Agenten" bezeichnet. Der Begriff "Löschen" wurde gewählt, weil viele (aber nicht alle) Reinigungs mittel aufgrund ihres relativ hohen Brechung index dem Gewebe ein gewisses Maß an optischer Klarheit oder Transparenz verleihen können. Ein weiterer kritischerDie Funktion von Clearing mitteln besteht darin, große Mengen Fett aus dem Gewebe zu entfernen, da Fett die Infiltration von Wachs behindern würde.

Xylol ist ein häufig verwendetes Clearing mittel, das mehrere Änderungen erfordert, um das Ethanol vollständig zu ersetzen.

Für Proben, die nicht dicker als 4mm sind, umfasst eine typische Clearing-Sequenz: Xylol 20 Minuten, Xylol weitere 20 Minuten, Xylol 45 Minuten.

5. Wachs infiltration

In diesem Stadium wird das Gewebe mit geeignetem histologischem Wachs infiltriert. Obwohl im Laufe der Jahre viele verschiedene Reagenzien bewertet und verwendet wurden, um diese Aufgabe zu erfüllen, bleibt histologisches Wachs auf Paraffin basis am weitesten verbreitet. Standard wachs bleibt bei 60 ° C flüssig und kann bei dieser Temperatur in das Gewebe eingeführt und dann auf 20 ° C abgekühlt werden, um sich auf eine Textur zu verfestigen, die für eine gleichmäßige Sektion geeignet ist. Diese Wachse bestehen aus gereinigtem Paraffin und verschiedenen Additiven, möglicher weise einschl ießlich Harzen wie Styrol oder Polyethylen. Es ist wichtig zu verstehen, dass diese Komponenten spezifische physikalische Eigenschaften haben, so dass das Wachs in dünne Scheiben geschnitten werden kann, die so schmal wie 2 Mikrometer sind und beim Schneiden auf einem Mikro tom Bänder bilden. und halten Sie genügend Flexibilität, um flach zu bleiben, wenn Sie auf einem warmen Wasserbad schwimmen.

Für Proben, die nicht dicker als 4mm sind, ist eine typische Infiltration sequenz:

Wachs 30 Minuten

Wachs 30 Minuten

Wachs 45 Minuten

6. Einbettung oder Blockierung

Sobald die Proben gründlich mit Wachs infiltriert wurden, müssen sie zu einem „ Block “geformt werden, um zum Schneiden auf einem Mikro tom montiert zu werden. Bei diesem Prozess wird ein „ Einbettung zentrum “verwendet, in dem geschmolzenes Wachs in eine Form gegossen und die Probe hinein gelegt wird. Es ist entscheidend, besonders auf die richtige Ausrichtung der Probe innerhalb der Form zu achten, da die Position der Probe die "Schnittebene" bestimmt. was in der Diagnose-und Forschungs histologie von entscheidender Bedeutung ist. Ein Einbettung sring wird dann auf die Form gelegt, mehr Wachs wird hinzugefügt und die gesamte Baugruppe wird zum Erstarren auf eine kalte Platte gelegt. Sobald dieser Vorgang abgeschlossen ist, kann der Gewebe block zusammen mit dem angebrachten Einbettung sring aus der Form entfernt werden und ist für die Mikro tomie bereit. Es ist erwähnens wert, dass der Wachs block, der die Gewebeprobe enthält, bei korrekter Gewebe verarbeitung sehr haltbar ist und als wesentliches Archiv material dienen kann.